Tip:
Highlight text to annotate it
X
I fas fyra, kommer vi vända våra initiala tvärbindande proteiner till DNA, följt av
rening av DNA. Börja med att ta varje IP prov samt ingång provet som
inte gå igenom de föregående IP steg och lägga 8 mikroliter 5 molar natrium
chloride att de 200 mikroliter prov följt av vortexning.
Inkubera vid 95 grader Celsius under 15 minuter. För att rena varje prov kommer vi att använda en DNA-bindande kiseldioxidkolonner enligt
enligt tillverkarens anvisningar. Först lägga till varje prov för de rätta mängderna
av DNA-bindande buffert i virveln, sedan överföra varje prov till en kolonn placerad inuti en
provröret. Centrifugera kolonnerna vid 15.000 g under 1 minut.
Kasta flödet genom från samlingen röret och lägga buffert DNA tvätt till varje kolumn.
Centrifugera kolonnerna vid 15000g under en minut. Kassera flödet genom från uppsamlingsröret
och snurra tomma kolumner på 15000g under två minuter för att säkerställa säker på att de är helt torra.
Kassera den gamla samlingen röret och placera reningskolonnen till ett nytt rent rör.
Lägg 50 mikroliter DNA elusion buffert direkt till membranet i kolonnen.
Låt sitta i en minut och sedan en slutlig centrifugering vid 15000g under 1 minut.
Kasta reningskolonnen och spara renade DNA vid -20 grader tills den sista fasen.