Tip:
Highlight text to annotate it
X
I dag två av vår ICC förfarande kommer vi att lägga vår sekundär antikropp, utföra
en valfri dubbel märkning och nukleär märkning steg,
montera våra täckglasen till bilder och få bilder av våra antikroppar med
en fluorescerande mikroskop.
Först
vi aspirera av primära antikroppar lösning efter genom tvättning av cellerna
tre gånger med PBST under fem minuter vardera.
Nästa förbereda floraform konjugerad sekundär antikropp som kommer att binda till
den primära antikroppen.
Späd den sekundära blockeringsbuffert
på rekommenderar utspädningen som anges på databladet
och inkubera vid rumstemperatur under en timme.
Täcker plattorna med folie förhindrar känsliga färgämnen från förnedrande.
Aspirera av den sekundära antikroppen följt av tvättning av cellerna
tre gånger med PBST
under fem minuter vardera.
Som ett valfritt steg en separat primär och sekundär par kan användas
att visualisera en andra epitop genom att använda en annan våning för det.
Dessutom kan DNA-bindande färgämnen såsom DAPI appliceras utan behov av
sekundära antikroppar.
Se hela skriftlig Novus protokoll för instruktioner om hur du dubbla och
trippel etikett.
Täckglas är nu redo att monteras på objektglas.
Ta en ren bild och fördela en droppe antifad monteringsmedium genom att långsamt
uppringning ner kolven av pipetten.
Ta försiktigt bort ett täckglas från brunnen,
att överskottet tvätt att rinna av
och placera cellerna nedåt på bilden.
Klar nagellack kan användas för att täta täckglas och hindra den från
uttorkning.
Objektglas kan nu visualiseras under ett mikroskop eller lagras vid -20
eller 4 grader i en mörk bild låda eller glida bok.
Begränsa mängden tid varje bild exponeras för mikroskop ljus kommer medhjälpare
att förlänga den fluorescerande signalen
och förhindra fotoblekning.